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大腸桿菌表達系統中,IPTG誘導蛋白表達的濃度和誘導時間通常如何確定??

日期:2025-11-03 15:42:02

    IPTG誘導濃度和時間需通過預實驗優化確定,常規參考范圍為濃度0.1–1.0mM、時間2–16h,最終以“目的蛋白產量高、雜蛋白少”為目標。
 
1.誘導濃度的確定方法
    常規參考范圍:0.1–1.0mM,最常用0.5mM作為初始嘗試濃度。
    優化方式:設置梯度濃度(如0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mM),相同誘導時間下,通過SDS-PAGE或WesternBlot檢測目的蛋白表達量,選取最優濃度。
    特殊情況:高濃度IPTG可能抑制細菌生長或導致蛋白包涵體形成,需降低濃度(如0.05–0.2mM);低表達蛋白可適當提高濃度,但不建議超過2.0mM。
 
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2.誘導時間的確定方法
    常規參考范圍:37℃誘導時2–6h,低溫誘導(16–25℃)時8–16h。
    優化方式:固定最優IPTG濃度,在不同時間點(如2、4、6、8、12h)取樣檢測,繪制表達量隨時間變化曲線,選取表達量峰值對應的時間。
    關鍵原則:避免誘導時間過短(蛋白未充分表達)或過長(雜蛋白增多、目的蛋白降解)。
 
3.影響優化的關鍵因素
    目的蛋白特性:可溶性蛋白可適當縮短誘導時間,難表達或易降解蛋白需延長低溫誘導時間。
    宿主菌和載體:不同菌株(如BL21、Rosetta)和啟動子(如T7、lac)對IPTG的敏感性不同,需針對性調整。