克隆化培養(yǎng)過(guò)程中，部分雜交瘤細(xì)胞可能出現(xiàn)抗體分泌能力下降或丟失，如何通過(guò)定期檢測(cè)抗體效價(jià)來(lái)穩(wěn)定細(xì)胞株特性？
日期：2025-10-15 13:15:37
通過(guò)定期檢測(cè)抗體效價(jià)穩(wěn)定雜交瘤細(xì)胞株特性，核心是建立“檢測(cè)-篩選-純化”的閉環(huán)管理流程，在抗體分泌能力下降前及時(shí)篩選出高分泌亞克隆，避免優(yōu)勢(shì)細(xì)胞株被低分泌株取代。
一、制定科學(xué)的抗體效價(jià)定期檢測(cè)計(jì)劃
檢測(cè)頻率需結(jié)合細(xì)胞培養(yǎng)階段調(diào)整，重點(diǎn)覆蓋“增殖關(guān)鍵期”和“傳代穩(wěn)定期”，確保及時(shí)發(fā)現(xiàn)效價(jià)變化。
初期克隆篩選階段（克隆化后1-4周）：檢測(cè)頻率最高，每3-5天檢測(cè)1次。此階段細(xì)胞克隆剛形成，不同亞克隆的抗體分泌能力差異大，需通過(guò)高頻檢測(cè)鎖定高分泌克隆（如效價(jià)≥1:10000的克隆）。
擴(kuò)大培養(yǎng)階段（4-8周）：每7天檢測(cè)1次。細(xì)胞從單克隆擴(kuò)大至大規(guī)模培養(yǎng)時(shí)，易因營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)出現(xiàn)低分泌株增殖優(yōu)勢(shì)，需通過(guò)檢測(cè)確認(rèn)效價(jià)是否穩(wěn)定（波動(dòng)幅度建議≤20%）。
長(zhǎng)期傳代/凍存復(fù)蘇后（8周以上）：每2周檢測(cè)1次。長(zhǎng)期傳代可能導(dǎo)致細(xì)胞基因組不穩(wěn)定，凍存復(fù)蘇可能損傷部分高分泌細(xì)胞，需通過(guò)檢測(cè)判斷細(xì)胞株是否仍符合生產(chǎn)/實(shí)驗(yàn)需求，若效價(jià)下降超30%，需啟動(dòng)復(fù)蘇備份或亞克隆篩選。
二、選擇適配的抗體效價(jià)檢測(cè)方法
不同檢測(cè)方法的靈敏度、特異性和操作效率不同，需根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模和實(shí)驗(yàn)需求選擇，確保檢測(cè)結(jié)果能真實(shí)反映抗體分泌能力。
ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）：首選方法，適用于絕大多數(shù)雜交瘤細(xì)胞。優(yōu)勢(shì)是靈敏度高（可檢測(cè)ng/mL級(jí)抗體）、特異性強(qiáng)（能區(qū)分目標(biāo)抗體與雜蛋白），且可通過(guò)梯度稀釋定量效價(jià)，缺點(diǎn)是操作稍繁瑣，需提前準(zhǔn)備包被抗原和二抗。
FCM（流式細(xì)胞術(shù)）：適用于分泌細(xì)胞表面抗體（如單抗）的雜交瘤細(xì)胞。優(yōu)勢(shì)是可直接檢測(cè)活細(xì)胞的抗體分泌量，無(wú)需收集上清，且能同時(shí)分析細(xì)胞活力，缺點(diǎn)是需特定熒光標(biāo)記二抗，成本較高。
WesternBlot（蛋白質(zhì)印跡法）：適用于需驗(yàn)證抗體特異性的場(chǎng)景。優(yōu)勢(shì)是可同時(shí)檢測(cè)抗體效價(jià)和特異性，避免篩選出“高分泌但非目標(biāo)抗體”的細(xì)胞株，缺點(diǎn)是操作耗時(shí)，不適用于高頻批量檢測(cè)。
三、基于檢測(cè)結(jié)果的細(xì)胞株穩(wěn)定措施
檢測(cè)發(fā)現(xiàn)效價(jià)下降后，需通過(guò)“篩選-純化-備份”三步法恢復(fù)或穩(wěn)定細(xì)胞株特性，避免直接丟棄導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)/生產(chǎn)中斷。
立即進(jìn)行亞克隆篩選：取效價(jià)下降的細(xì)胞株，通過(guò)有限稀釋法或單細(xì)胞分選儀（如流式分選）獲得單克隆細(xì)胞，重新進(jìn)行克隆化培養(yǎng)。對(duì)每個(gè)新克隆，從第3天開(kāi)始檢測(cè)效價(jià)，篩選出效價(jià)恢復(fù)至初始水平80%以上的克隆，作為新的主細(xì)胞株。
優(yōu)化培養(yǎng)條件減少效價(jià)流失：分析效價(jià)下降可能的環(huán)境因素，針對(duì)性調(diào)整培養(yǎng)條件。例如：若細(xì)胞密度過(guò)高導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)不足，可降低傳代密度（如從1×10^5cells/mL調(diào)整為5×10^4cells/mL）；若血清批次影響抗體分泌，可更換為胎牛血清（FBS）批次，并提前進(jìn)行血清兼容性測(cè)試。
建立多級(jí)細(xì)胞庫(kù)備份：在細(xì)胞株效價(jià)穩(wěn)定期（如連續(xù)3次檢測(cè)效價(jià)波動(dòng)≤15%），建立“主細(xì)胞庫(kù)（MCB）-工作細(xì)胞庫(kù)（WCB）”兩級(jí)備份。主細(xì)胞庫(kù)凍存10-20支，用于長(zhǎng)期保存；工作細(xì)胞庫(kù)從主細(xì)胞庫(kù)復(fù)蘇后擴(kuò)大培養(yǎng)，凍存50-100支，用于日常實(shí)驗(yàn)/生產(chǎn)。每次復(fù)蘇工作細(xì)胞庫(kù)前，需檢測(cè)效價(jià)，確保與主細(xì)胞庫(kù)一致。
