ELISA檢測(cè)試劑盒中常用的酶標(biāo)記物AP如何通過底物反應(yīng)產(chǎn)生可檢測(cè)信號(hào)？
日期：2025-11-06 14:47:34
AP堿性磷酸酶通過催化底物發(fā)生水解或氧化還原反應(yīng)，生成有色、發(fā)光或熒光產(chǎn)物，從而將抗原抗體結(jié)合的免疫信號(hào)轉(zhuǎn)化為可檢測(cè)的物理信號(hào)。
1、核心反應(yīng)機(jī)制
底物選擇是關(guān)鍵，AP的底物需能在酶催化下產(chǎn)生可量化信號(hào)。
酶催化反應(yīng)具有特異性，AP僅作用于特定結(jié)構(gòu)的底物（如含磷酸基團(tuán)的化合物）。
反應(yīng)產(chǎn)物的信號(hào)強(qiáng)度與酶標(biāo)記物的量正相關(guān)，間接反映抗原/抗體的濃度。
2、常見底物與信號(hào)類型
有色底物（比色法）：如對(duì)硝基苯基磷酸酯（pNPP），水解后生成黃色的對(duì)硝基苯酚，可通過分光光度計(jì)在405nm波長(zhǎng)下檢測(cè)吸光度。
發(fā)光底物（化學(xué)發(fā)光法）：如AMPPD，被AP催化后分解，釋放出高效、持久的化學(xué)發(fā)光，通過化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀捕獲光信號(hào)。
熒光底物（熒光法）：如4-甲基傘形酮基磷酸酯（4-MUP），水解后生成具有強(qiáng)熒光的4-甲基傘形酮，可通過熒光分光光度計(jì)檢測(cè)熒光強(qiáng)度。
