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使用ELISA檢測試劑盒進行實驗時,洗滌步驟為什么不能省略?

日期:2025-10-30 14:10:26

    洗滌步驟是ELISA實驗中消除干擾、保證結果特異性的核心環節,完全不能省略。其核心作用是去除反應體系中未結合的物質,避免這些物質對后續檢測產生非特異性干擾,最終確保結果的準確性和可靠性。
 
1.去除未結合的抗體/抗原,避免假陽性
    在ELISA的孵育過程中(如加一抗、二抗后),體系內會存在大量未與固相載體(酶標板)結合的游離抗體或抗原。
    若不洗滌直接進入下一步,這些游離物質會留在板孔中,后續與底物反應時可能產生非特異性信號,導致檢測結果出現假陽性,無法區分真實結合與游離干擾。
 
2.降低背景信號,提升結果靈敏度
    封閉步驟后,板孔表面仍可能殘留少量未被封閉的位點,或存在非特異性吸附的雜質、試劑成分(如封閉液中的蛋白、稀釋液成分)。
    洗滌能將這些物質沖洗掉,減少它們與酶標記物或底物的非特異性反應,從而降低整個檢測的背景信號。背景信號越低,真實陽性信號越容易被準確識別,實驗的靈敏度也會隨之提升。
 
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3.保證反應體系均一,維持檢測穩定性
    每一步孵育后,板孔內的反應液成分(如抗體濃度、緩沖液比例)可能存在差異,且可能殘留前一步的試劑。
    洗滌過程會用統一的洗滌液(如含吐溫的PBS)沖洗板孔,既能去除殘留試劑,又能使每個板孔的反應環境保持一致,避免因體系不均一導致的結果波動,保證平行樣本檢測的穩定性。