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血漿樣本在使用ELISA檢測試劑盒前需經過哪些預處理步驟?

日期:2025-10-30 14:05:15

    血漿樣本在使用ELISA試劑盒前,核心預處理步驟主要包括樣本解凍與混勻、離心澄清、稀釋調整和避免反復凍融這四個環節。
 
1.樣本解凍與充分混勻
    從冷凍環境中取出的血漿樣本,需在室溫或4℃條件下自然解凍,避免直接高溫加熱,防止蛋白變性。
    解凍后必須輕輕顛倒離心管10-20次,或使用漩渦振蕩器低速混勻,確保樣本中目標檢測物濃度均勻,避免局部濃度差異影響結果。
 
2.離心澄清去除雜質
    解凍混勻后的樣本需進行離心處理,通常以1000-3000×g的轉速離心5-10分鐘(具體參數可參考試劑盒說明書)。
    離心目的是去除樣本中可能存在的細胞碎片、纖維蛋白凝塊等雜質,避免這些物質吸附在ELISA板孔上,干擾抗原抗體結合或導致背景值升高。
 
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3.按試劑盒要求稀釋樣本
    多數情況下,血漿樣本需用試劑盒配套的稀釋液(如SampleDiluent)進行稀釋,使目標檢測物濃度落在試劑盒的線性檢測范圍內。
    稀釋比例需嚴格遵循試劑盒說明書,不可隨意更改。若樣本中目標物濃度過高,需進行梯度稀釋后再檢測,避免超出標準曲線范圍導致結果不準確。
 
4.避免反復凍融
    血漿樣本解凍后應盡快使用,若一次無法用完,需按照說明書要求分裝成小體積(如50-100μL/管),并立即放回-20℃或-80℃冷凍保存。
    反復凍融會破壞樣本中的蛋白結構,導致目標檢測物降解,同時可能產生更多雜質,嚴重影響檢測結果的可靠性,一般建議凍融次數不超過3次。