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用ELISA檢測試劑盒檢測時,為什么有時需要稀釋樣本?

日期:2025-10-24 11:17:56

    核心原因是為了讓樣本中待測物質的濃度落在試劑盒的線性檢測范圍內,從而得到準確結果。
一、核心原因
1、避免 “鉤狀效應”(Hook Effect)
    當樣本中待測物質濃度過高時,會同時飽和試劑盒中的酶標抗體和固相抗體,導致形成的免疫復合物減少,最終檢測結果偏低甚至出現假陰性,這種現象就是鉤狀效應。稀釋可以降低待測物濃度,避免該效應。

2、
匹配試劑盒檢測范圍
    每個 ELISA 試劑盒都有固定的線性檢測范圍(如 10-1000pg/mL)。若樣本濃度高于這個范圍上限,直接檢測會超出標準曲線的線性區間,結果不準確;若濃度過低,可通過濃縮而非稀釋處理,但稀釋是應對高濃度樣本的主要手段。
減少基質效應干擾
    樣本中的基質成分(如血清中的蛋白質、脂類)可能會干擾抗原抗體的特異性結合,導致檢測結果出現偏差。適當稀釋樣本可以降低這些干擾物質的濃度,減少基質效應對檢測結果的影響。
 
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二、關鍵注意事項
    稀釋時必須使用試劑盒配套的稀釋液,不能用蒸餾水或生理鹽水,否則會改變反應體系的 pH 值和離子強度,影響檢測結果。
    需嚴格按照說明書的推薦稀釋比例進行,或通過預實驗確定最佳稀釋倍數,避免過度稀釋導致待測物濃度低于檢測下限。