血清樣本需經(jīng)過哪些處理才能用于ELISA檢測試劑盒？
日期：2025-10-22 13:52:06
血清樣本用于ELISA檢測前，需經(jīng)過離心分離、澄清處理、稀釋（按需）和質(zhì)量檢查這四大核心步驟，以去除雜質(zhì)、確保樣本濃度適配并排除干擾。
1、樣本采集與初步處理：獲取合格血清
這是后續(xù)所有步驟的基礎(chǔ)，直接決定樣本質(zhì)量。
選擇合適采血管：使用無抗凝劑的真空采血管（如普通紅色帽管），避免EDTA、肝素等抗凝劑對ELISA反應(yīng)的干擾。
規(guī)范采集操作：按照無菌操作要求采集靜脈血，采血量需滿足試劑盒說明書建議（通常1-5mL）。
室溫靜置凝血：采血后將試管垂直放置于室溫（20-25℃）環(huán)境，靜置30-60分鐘，讓血液自然凝固形成血凝塊。
2、離心分離：分離血清與血細(xì)胞
通過離心力將血清從血凝塊和血細(xì)胞中分離出來，是獲取檢測用血清的關(guān)鍵步驟。
設(shè)定離心參數(shù)：一般采用3000-4000rpm（約1000-1500×g）的轉(zhuǎn)速，離心10-15分鐘。具體參數(shù)需參考試劑盒或?qū)嶒炇覙?biāo)準(zhǔn)操作流程（SOP）。
小心收集血清：離心后溶液會分層，上層淡黃色透明液體即為血清。使用移液器緩慢吸取血清至新的無菌離心管中，避免吸入下層的血細(xì)胞或血凝塊沉淀。
3、澄清與除雜：消除潛在干擾物質(zhì)
若血清中存在微小沉淀或雜質(zhì)，可能導(dǎo)致檢測結(jié)果假陽性或吸光度異常，需進一步處理。
低溫二次離心：若血清出現(xiàn)輕微渾濁，可將其置于4℃冰箱冷藏30分鐘，再以3000rpm離心5-10分鐘，取上清液備用。
避免反復(fù)凍融：血清分離后若不立即檢測，需分裝成小體積（如50-100μL/管），置于-20℃或-80℃冷凍保存。反復(fù)凍融會破壞血清中的抗原/抗體，導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。
4、樣本稀釋（按需）：適配試劑盒檢測范圍
ELISA試劑盒對樣本中目標(biāo)物質(zhì)的濃度有特定檢測范圍，血清樣本需根據(jù)說明書進行稀釋，避免濃度過高導(dǎo)致結(jié)果超出線性范圍（假陰性）或濃度過低無法檢出。
選擇專用稀釋液：必須使用試劑盒配套的樣本稀釋液，不可用生理鹽水或蒸餾水替代，以防改變反應(yīng)體系pH值或離子濃度。
嚴(yán)格按比例稀釋：例如說明書要求1:100稀釋，則取1μL血清加入99μL稀釋液中，充分混勻后再進行檢測。稀釋比例需精準(zhǔn)，建議使用移液器進行定量操作。
5.質(zhì)量檢查：排除不合格樣本
在正式檢測前，需快速判斷血清樣本是否合格，避免無效檢測。
外觀檢查：合格血清應(yīng)為淡黃色透明液體，無明顯溶血（紅色）、脂血（乳白色渾濁）或嚴(yán)重黃疸（深黃色），這些情況會干擾吸光度檢測。
污染排查：觀察血清中是否有絮狀沉淀、霉菌或細(xì)菌菌落，若存在污染則需重新采集樣本。
