ELISA結(jié)果中 “Cut-off 值” 的含義是？怎么計算？
日期：2025-08-21 15:03:09
在ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗中，Cut-off值（臨界值） 是判斷檢測結(jié)果為 “陽性” 或 “陰性” 的分界點，其核心作用是區(qū)分 “有意義的特異性信號” 與 “無意義的背景信號或非特異性信號”，確保檢測結(jié)果的準確性和一致性。
一、Cut-off值的含義
ELISA通過酶催化底物產(chǎn)生的吸光度（OD值）反映樣本中目標物質(zhì)（如抗原、抗體、蛋白等）的含量。由于實驗中存在試劑背景、非特異性結(jié)合等因素，即使樣本中不含目標物質(zhì)，也可能產(chǎn)生一定的OD值（即 “陰性背景”）。
Cut-off值是人為設(shè)定的臨界OD值：
當樣本OD值≥Cut-off 值 時，判定為 “陽性”（提示樣本中可能存在目標物質(zhì)，且信號強度超過背景閾值）；
當樣本OD值
其本質(zhì)是通過統(tǒng)計學(xué)或標準化方法，平衡檢測的 “靈敏度”（避免漏檢）和 “特異性”（避免假陽性），減少實驗誤差對結(jié)果判讀的影響。
二、Cut-off值的常見計算方法
Cut-off值的計算需根據(jù)實驗?zāi)康摹颖绢愋停ㄈ缪濉⒓毎锨澹┖驮噭┨匦裕ㄈ缡欠駷樯唐坊噭┖校┐_定，常見方法如下：
1. 基于陰性對照的計算（最常用）
通過檢測一定數(shù)量的 “陰性對照樣本”（已知不含目標物質(zhì)的樣本，如健康人血清、空白緩沖液等），利用其 OD 值計算 Cut-off 值，適用于自定義實驗或非標準化檢測。
公式 1：均值+2倍標準差（x?+2SD）
檢測至少20份陰性對照樣本，計算其 OD 值的平均值（x?）和標準差（SD）；
Cut-off值=x?+2SD。
原理：正態(tài)分布中，95%陰性樣本OD值會落在 “x? ± 2SD” 范圍內(nèi)，超過此范圍的信號被認為是 “異常信號”（可能為陽性）。
公式 2：均值+3倍標準差（x? + 3SD）
適用于對特異性要求極高的場景（如傳染病診斷），可減少假陽性，但可能降低靈敏度（增加漏檢風(fēng)險）。
公式 3：均值×系數(shù)（如 1.1-1.5）
當陰性對照OD值波動較小時，直接用 “陰性均值 × 固定系數(shù)” 作為 Cut-off 值（系數(shù)需通過預(yù)實驗確定）。
2. 基于陽性對照和陰性對照的組合計算
適用于需要同時考慮陽性信號強度的場景（如競爭法 ELISA），或商品化試劑盒的標準化設(shè)定。
公式：（陰性對照均值+陽性對照均值）×系數(shù)
例如：Cut-off值=（陰性均值 + 陽性均值）×0.5，通過平衡陰、陽性信號的中間值作為臨界線。
3. 商品化試劑盒的固定 Cut-off 值
市售ELISA試劑盒通常會直接提供預(yù)設(shè)的 Cut-off 值或明確的計算方法（如說明書中指定 “陰性對照均值 ×1.2”），其數(shù)值經(jīng)過大量驗證，確保不同實驗室、不同批次檢測結(jié)果的一致性。
原因：商品化試劑的生產(chǎn)工藝標準化，陰性背景和信號強度更穩(wěn)定，無需用戶自行計算。
4. 基于臨界參考品的計算
在臨床診斷類ELISA中（如病毒抗體檢測），可能使用 “臨界參考品”（已知接近陽性/陰性邊界的樣本），直接將其OD值作為 Cut-off值，確保與臨床診斷標準一致。
三、注意事項
陰性對照的質(zhì)量：陰性對照需確認真實不含目標物質(zhì)，且數(shù)量足夠（通常≥20份），否則會導(dǎo)致Cut-off值偏差。
實驗重復(fù)性：若同一樣本多次檢測的OD值接近Cut-off值（即 “灰區(qū)”），需重復(fù)實驗或結(jié)合其他方法驗證，避免誤判。
方法學(xué)差異：不同ELISA類型（如間接法、雙抗體夾心法、競爭法）的Cut-off值計算邏輯可能不同，需結(jié)合具體實驗設(shè)計調(diào)整。
Cut-off值是ELISA結(jié)果判讀的 “標尺”，其計算核心是通過統(tǒng)計學(xué)方法排除背景干擾，確保檢測結(jié)果的可靠性，具體方法需根據(jù)實驗?zāi)康暮蜆颖咎匦造`活選擇。
