elisa試劑盒中封閉液的作用及常用成分有哪些？
日期：2025-07-29 15:20:11
在ELISA實(shí)驗(yàn)中，封閉液是確保檢測準(zhǔn)確性的關(guān)鍵試劑之一，其作用和常用成分如下：
一、封閉液的核心作用
ELISA的固相載體（如微孔板）表面存在大量未被包被抗原 / 抗體占據(jù)的 “空白位點(diǎn)”，這些位點(diǎn)可能與后續(xù)加入的酶標(biāo)抗體、樣本中的非特異性蛋白發(fā)生非特異性結(jié)合，導(dǎo)致背景信號(hào)升高（即 “假陽性” 或數(shù)值偏高）。
封閉液的作用是：利用惰性蛋白或其他分子與固相載體表面的空白位點(diǎn)結(jié)合，“封閉” 這些非特異性結(jié)合位點(diǎn)，從而降低背景干擾，提高檢測的特異性和信噪比。
二、常用封閉液成分及特點(diǎn)
封閉液的核心成分是能與固相載體結(jié)合的惰性物質(zhì)，需滿足 “不與抗原 / 抗體發(fā)生特異性反應(yīng)、能穩(wěn)定占據(jù)空白位點(diǎn)” 的要求。常見類型包括：
1. 蛋白質(zhì)類封閉液（最常用）
（1）牛血清白蛋白（BSA）
成分：通常為5%（w/v）BSA 溶液（溶于PBS或Tris緩沖液）。
特點(diǎn)：純度高、非特異性結(jié)合低，適用于多數(shù) ELISA 檢測，尤其適合對(duì)干擾敏感的實(shí)驗(yàn)。
注意：需使用無脂肪酸的BSA，避免脂肪酸對(duì)某些酶反應(yīng)的抑制。
（2）脫脂奶粉（Skim Milk）
成分：通常為5%（w/v）脫脂奶粉溶液（溶于PBS或PBST）。
特點(diǎn)：成本低、封閉效果強(qiáng)，適用于多數(shù)常規(guī) ELISA。
注意：含酪蛋白，可能與抗牛奶蛋白的抗體發(fā)生交叉反應(yīng)，且不適用于生物素 - 親和素系統(tǒng)（奶粉中含生物素類似物）。
（3）胎牛血清（FBS）或正常動(dòng)物血清
成分：通常為10%（v/v）血清溶液（溶于緩沖液）。
特點(diǎn)：血清中含多種惰性蛋白，封閉效果全面，適合復(fù)雜樣本（如血清、組織勻漿）的檢測。
注意：需使用與二抗來源不同的動(dòng)物血清（如二抗為兔源，可選用山羊血清），避免交叉反應(yīng)。
2. 非蛋白質(zhì)類封閉液
（1）聚乙烯吡咯烷酮（PVP）
成分：1-5% PVP溶液（溶于緩沖液）。
特點(diǎn)：不含蛋白，適用于對(duì)蛋白敏感的檢測系統(tǒng)（如某些酶標(biāo)記實(shí)驗(yàn)），或避免蛋白污染的場景。
（2）明膠（Gelatin）
成分：0.5% 明膠溶液（溶于緩沖液，需加熱溶解）。
特點(diǎn)：成本低，適合部分固相載體的封閉，但封閉效果弱于 BSA 或奶粉。
3. 緩沖液基礎(chǔ)
上述封閉液通常需溶解在緩沖液中（如PBS、Tris-HCl），部分會(huì)添加0.05% Tween-20（表面活性劑），以增強(qiáng)封閉效果并減少非特異性結(jié)合。
三、選擇原則
封閉液的選擇需根據(jù)實(shí)驗(yàn)體系（如抗原 / 抗體類型、樣本性質(zhì)）調(diào)整：
常規(guī)檢測優(yōu)先選5%脫脂奶粉（經(jīng)濟(jì)高效）或 1-5% BSA（低干擾）；
生物素 - 親和素系統(tǒng)避免用脫脂奶粉，改用 BSA；
樣本含高濃度非特異性蛋白時(shí)，可嘗試正常動(dòng)物血清；
需通過預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證封閉液的效果（如檢測空白孔的OD值，選擇背景最低的方案）。
總之，封閉液的核心目標(biāo)是 “特異性封閉空白位點(diǎn)”，其選擇直接影響ELISA的靈敏度和準(zhǔn)確性。
