elisa試劑盒與膠體金檢測(cè)試劑盒的技術(shù)原理區(qū)別？
日期：2025-07-29 15:14:01
ELISA試劑盒與膠體金檢測(cè)試劑盒均基于抗原-抗體特異性反應(yīng)，但兩者的技術(shù)原理、反應(yīng)流程及信號(hào)產(chǎn)生方式存在顯著差異，具體如下：
一、技術(shù)原理核心差異
1. ELISA試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）
ELISA的核心是 “酶標(biāo)記 + 底物顯色”，通過(guò)酶對(duì)底物的催化反應(yīng)放大信號(hào)，實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)物的檢測(cè)。其原理可拆解為以下步驟：
固相包被：將抗原或抗體預(yù)先固定在固相載體（如聚苯乙烯微孔板）上，形成 “捕獲層”。
樣本反應(yīng)：加入待檢測(cè)樣本（含目標(biāo)抗原/抗體），樣本中的目標(biāo)物與固相載體上的抗原/抗體特異性結(jié)合，形成 “抗原-抗體復(fù)合物”。
酶標(biāo)結(jié)合：加入酶標(biāo)記的二抗（或酶標(biāo)記抗原），其與上述復(fù)合物特異性結(jié)合，使酶被 “錨定” 在固相載體上。常用酶包括辣根過(guò)氧化物酶（HRP）、堿性磷酸酶（ALP）等。
底物顯色：加入酶的特異性底物（如 TMB、OPD），酶催化底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生可檢測(cè)的顏色變化（如藍(lán)色、黃色）。
信號(hào)讀取：通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定反應(yīng)液的吸光度（OD值），吸光度與目標(biāo)物濃度正相關(guān)，可實(shí)現(xiàn)定量分析。
2. 膠體金檢測(cè)試劑盒
膠體金檢測(cè)的核心是 “納米金顆粒標(biāo)記 + 肉眼可見顯色”，利用膠體金顆粒的物理特性（自身顯色）直接顯示反應(yīng)結(jié)果，無(wú)需酶和底物。其原理以最常見的免疫層析法 ** 為例：
膠體金標(biāo)記：將抗體（或抗原）與膠體金顆粒（直徑 1-100nm 的金納米顆粒，呈紅色）結(jié)合，形成 “金標(biāo)探針”，預(yù)先吸附在結(jié)合墊上。
樣本層析：待檢測(cè)樣本滴加在試紙條的樣本墊上，通過(guò)毛細(xì)作用向另一端（吸水墊）流動(dòng)，途中與結(jié)合墊上的金標(biāo)探針結(jié)合，形成 “金標(biāo)探針 - 目標(biāo)物復(fù)合物”。
線帶顯色：復(fù)合物流動(dòng)至檢測(cè)線（T線，固定有特異性抗體 / 抗原）時(shí)，再次發(fā)生特異性結(jié)合，金標(biāo)顆粒在T線處聚集，呈現(xiàn)紅色條帶；未結(jié)合的金標(biāo)探針繼續(xù)流動(dòng)至質(zhì)控線（C線，固定有抗金標(biāo)探針抗體），與之結(jié)合顯色（確保試紙條有效）。
結(jié)果判斷：通過(guò)肉眼觀察T線和C線是否顯色，實(shí)現(xiàn)定性（或半定量）分析。
二、關(guān)鍵技術(shù)細(xì)節(jié)對(duì)比
| 對(duì)比維度 | ELISA 試劑盒 | 膠體金檢測(cè)試劑盒 |
| 標(biāo)記物 | 酶（HRP、ALP 等） | 膠體金顆粒（自身呈紅色，無(wú)需額外標(biāo)記） |
| 信號(hào)產(chǎn)生方式 | 酶催化底物顯色（需底物參與，化學(xué)反應(yīng)） | 金顆粒聚集顯色（物理聚集，無(wú)需底物） |
| 反應(yīng)載體 | 聚苯乙烯微孔板（固相，靜態(tài)反應(yīng)） | 硝酸纖維素膜（NC 膜，動(dòng)態(tài)層析） |
| 操作步驟 | 多步孵育（3-4 次，每次 30-60 分鐘）+ 多次洗滌（去除未結(jié)合物） | 一步加樣（樣本自行層析），無(wú)需洗滌 |
| 檢測(cè)時(shí)間 | 較長(zhǎng)（1-3 小時(shí)） | 快速（5-30 分鐘） |
| 定量能力 | 可準(zhǔn)確定量（通過(guò) OD 值與標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度） | 多為定性（陽(yáng)性 / 陰性），部分可半定量 |
| 靈敏度 | 較高（酶催化放大信號(hào)，可檢測(cè) ng 甚至 pg 級(jí)） | 中等（無(wú)信號(hào)放大，多檢測(cè) μg 級(jí)） |
| 背景干擾 | 需嚴(yán)格洗滌避免非特異性結(jié)合，否則易有背景 | 層析過(guò)程可減少非特異性結(jié)合，背景較低 |
ELISA通過(guò) 酶-底物 的信號(hào)放大效應(yīng)，適合高靈敏度、準(zhǔn)確定量的檢測(cè)（如激素、病毒抗體定量）；而膠體金依賴金顆粒的物理顯色和層析技術(shù)，優(yōu)勢(shì)在于快速、操作簡(jiǎn)便，適合現(xiàn)場(chǎng)篩查或定性檢測(cè)（如早孕試紙、新冠抗原檢測(cè)）。兩者的原理差異決定了其在應(yīng)用場(chǎng)景上的互補(bǔ)性。
