elisa試劑盒檢測(cè)樣本的保存溫度-20℃和-80℃怎么選擇？

日期：2025-07-24 15:24:06

在ELISA檢測(cè)中，樣本的保存溫度（-20℃ vs -80℃）選擇需結(jié)合樣本類型、保存時(shí)間、目標(biāo)檢測(cè)物特性（如穩(wěn)定性、易降解性）及實(shí)驗(yàn)需求綜合判斷，核心目的是最大限度減少樣本中抗原 / 抗體等目標(biāo)分子的降解或活性喪失，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。以下從關(guān)鍵影響因素、適用場(chǎng)景及操作要點(diǎn)展開分析：

一、核心差異：-20℃與-80℃的低溫保存原理

低溫通過(guò)降低分子運(yùn)動(dòng)速率、抑制酶活性（如蛋白酶、核酸酶）和微生物生長(zhǎng)，延緩樣本中生物分子的降解。兩者的核心區(qū)別在于低溫強(qiáng)度和對(duì)分子穩(wěn)定性的保護(hù)能力：

-20℃：屬于常規(guī)低溫保存，可抑制大部分蛋白酶活性，但無(wú)法完全阻斷某些易降解分子（如小分子肽、細(xì)胞因子、酶類）的緩慢降解，且反復(fù)凍融會(huì)加速分子結(jié)構(gòu)破壞。

-80℃：屬于超低溫保存，能更徹底地抑制酶活性和分子運(yùn)動(dòng)，對(duì)熱敏感或易降解的生物分子保護(hù)效果更強(qiáng)，適合長(zhǎng)期保存或珍貴樣本。

二、保存溫度選擇的關(guān)鍵依據(jù)

1. 樣本類型及目標(biāo)檢測(cè)物的穩(wěn)定性

不同樣本中目標(biāo)分子的穩(wěn)定性差異顯著，是溫度選擇的核心依據(jù)：

樣本類型	常見檢測(cè)物	推薦保存溫度	核心原因
血清/血漿	常規(guī)抗體、大分子蛋白（如 IgG）	-20℃（短期）；-80℃（長(zhǎng)期）	血清中含天然蛋白酶抑制劑，大分子蛋白較穩(wěn)定，-20℃可滿足1–3個(gè)月保存；但長(zhǎng)期（>3個(gè)月）或檢測(cè)小分子（如激素、細(xì)胞因子）需- 80℃。
血清/血漿	小分子肽、細(xì)胞因子（如 IL-6、TNF-α）、激素（如胰島素）	優(yōu)先 -80℃	此類分子易被蛋白酶降解，-20℃下短期（<1個(gè)月）可能降解，-80℃可延長(zhǎng)至6–12個(gè)月穩(wěn)定。
細(xì)胞裂解液/組織勻漿	胞內(nèi)蛋白、酶類（如激酶、凋亡相關(guān)蛋白）	優(yōu)先 -80℃	細(xì)胞/組織中含大量?jī)?nèi)源性蛋白酶，-20℃無(wú)法完全抑制其活性，易導(dǎo)致目標(biāo)蛋白降解，-80℃可顯著延緩。
尿液、唾液	小分子代謝物、分泌型蛋白	-20℃（短期）；-80℃（長(zhǎng)期）	尿液中成分較簡(jiǎn)單，但部分代謝物（如兒茶酚胺）易氧化，長(zhǎng)期保存需-80℃；唾液中酶活性較高，長(zhǎng)期建議-80℃。
腦脊液、腹水	低豐度蛋白、抗體	優(yōu)先-80℃	樣本珍貴且目標(biāo)分子濃度低，-80℃可減少降解導(dǎo)致的檢測(cè)信號(hào)丟失。

2. 保存時(shí)間

保存時(shí)間越長(zhǎng)，對(duì)低溫保護(hù)的要求越高：

短期保存（≤1個(gè)月）：多數(shù)樣本（如血清、血漿中的穩(wěn)定蛋白）可選擇-20℃，操作便捷且能滿足常規(guī)實(shí)驗(yàn)需求。

中期保存（1–6個(gè)月）：建議優(yōu)先-80℃，尤其針對(duì)易降解分子（如細(xì)胞因子、激素），避免 - 20℃下的緩慢降解累積影響結(jié)果。

長(zhǎng)期保存（>6個(gè)月或長(zhǎng)期存檔）：無(wú)論樣本類型，均推薦-80℃，尤其是珍貴樣本（如臨床樣本、稀有生物樣本），可最大限度延長(zhǎng)目標(biāo)分子的穩(wěn)定期。

3. 樣本凍融次數(shù)

反復(fù)凍融是導(dǎo)致樣本降解的重要因素（凍融過(guò)程中冰晶形成會(huì)破壞分子結(jié)構(gòu)，釋放胞內(nèi)蛋白酶）：

若樣本需多次取用（如分批次檢測(cè)），即使短期保存，也建議分裝后-80℃保存，減少凍融次數(shù)（-80℃下分裝樣本的穩(wěn)定性優(yōu)于-20℃）。

若僅單次檢測(cè)，且保存時(shí)間≤1個(gè)月，-20℃分裝保存即可。

4. 樣本珍貴性及實(shí)驗(yàn)成本

珍貴樣本（如臨床活檢樣本、稀有動(dòng)物樣本）或難以重復(fù)獲取的樣本，建議直接-80℃保存，避免因-20℃保存不當(dāng)導(dǎo)致樣本失效。

-80℃冰箱設(shè)備成本和能耗較高，若樣本量大且保存時(shí)間短（如臨時(shí)實(shí)驗(yàn)樣本），-20℃更經(jīng)濟(jì)實(shí)用。

三、操作要點(diǎn)：最大化樣本穩(wěn)定性

無(wú)論選擇哪種溫度，以下操作可進(jìn)一步減少降解風(fēng)險(xiǎn)：

分裝保存：將樣本按單次檢測(cè)量分裝至無(wú)菌離心管（避免使用血清管反復(fù)凍融），每管體積以 100–500μL為宜，減少凍融次數(shù)。

快速冷凍：樣本收集后應(yīng)盡快置于 - 20℃或 - 80℃冷凍（可先放-80℃ 1小時(shí)快速凍結(jié)，再轉(zhuǎn)移至對(duì)應(yīng)溫度長(zhǎng)期保存），避免室溫放置過(guò)久。

避免反復(fù)凍融：取出樣本后室溫或4℃緩慢解凍，解凍后輕輕混勻（避免劇烈振蕩導(dǎo)致蛋白變性），未用完的樣本不可再次冷凍，需 4℃短期保存（≤24 小時(shí)）并盡快檢測(cè)。

添加保護(hù)劑：對(duì)易降解樣本（如細(xì)胞裂解液），可添加蛋白酶抑制劑（如 PMSF、cocktail 抑制劑）后再冷凍，增強(qiáng)穩(wěn)定性。

優(yōu)先選-80℃的場(chǎng)景：長(zhǎng)期保存（>3個(gè)月）、易降解分子（細(xì)胞因子、小分子肽）、細(xì)胞 / 組織樣本、珍貴樣本或需多次凍融的樣本。

可選-20℃的場(chǎng)景：短期保存（≤1個(gè)月）、穩(wěn)定大分子蛋白（如常規(guī)抗體）、單次檢測(cè)樣本或低成本實(shí)驗(yàn)需求。

核心原則：“不穩(wěn)定分子優(yōu)先-80℃，短期穩(wěn)定樣本可-20℃，分裝凍存 + 減少凍融是關(guān)鍵”，最終需結(jié)合預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證（如對(duì)比不同保存溫度下的檢測(cè)值差異）優(yōu)化方案。