如果elisa檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)異常，可能的原因有哪些？
日期：2025-04-16 10:07:00
可能的原因包括樣本問題，如樣本采集不當(dāng)、保存時(shí)間過長(zhǎng)或保存條件不當(dāng)、樣本被污染等；試劑問題，如試劑盒過期、試劑保存不當(dāng)導(dǎo)致失效、試劑配制錯(cuò)誤等；實(shí)驗(yàn)操作問題，如加樣不準(zhǔn)確、溫育時(shí)間和溫度不合適、洗板不充分、酶標(biāo)記物或底物溶液使用不當(dāng)?shù)龋粌x器問題，如酶標(biāo)儀故障、移液器不準(zhǔn)確等。此外，也可能存在樣本中存在干擾物質(zhì)，影響了檢測(cè)結(jié)果。
ELISA 檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)異常的原因較為復(fù)雜，涵蓋實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、樣本、試劑、操作以及儀器設(shè)備等多個(gè)方面，以下是具體分析：
1.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)問題
樣本選擇不當(dāng)：若選取的樣本類型不合適，如檢測(cè)血液中的某種標(biāo)志物卻使用了唾液樣本，或者樣本中存在干擾物質(zhì)，如類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體等，都可能導(dǎo)致結(jié)果異常。
對(duì)照設(shè)置不合理：缺少必要的對(duì)照，如陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、空白對(duì)照等，或者對(duì)照設(shè)置錯(cuò)誤，無(wú)法準(zhǔn)確判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性，也難以發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)過程中的問題。
2.樣本處理與保存問題
樣本采集不規(guī)范：采血過程中止血帶使用時(shí)間過長(zhǎng)、采血不順利導(dǎo)致溶血，或者采集的組織樣本沒有及時(shí)處理，都可能影響檢測(cè)結(jié)果。例如，溶血會(huì)使紅細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)釋放到血清中，干擾檢測(cè)。
樣本保存不當(dāng)：樣本保存溫度不合適，如未按要求在低溫下保存，或反復(fù)凍融，會(huì)使樣本中的抗原或抗體變性、降解，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。
樣本處理過程有誤：在樣本處理過程中，如離心轉(zhuǎn)速、時(shí)間設(shè)置不正確，或者在稀釋樣本時(shí)操作不精確，都會(huì)造成結(jié)果異常。
3.試劑問題
試劑質(zhì)量不佳：使用了過期、變質(zhì)或質(zhì)量不合格的試劑，如酶標(biāo)抗體活性降低、底物顯色效果差等，會(huì)直接影響檢測(cè)結(jié)果。
試劑保存不當(dāng)：試劑未按要求的條件保存，如未在規(guī)定的溫度下避光保存，會(huì)使試劑的穩(wěn)定性下降，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)偏差。
試劑配制錯(cuò)誤：在配制試劑時(shí)，如緩沖液的 pH 值不準(zhǔn)確、試劑濃度配制錯(cuò)誤，會(huì)影響抗原 - 抗體的結(jié)合反應(yīng)，進(jìn)而導(dǎo)致異常結(jié)果。
4.操作問題
加樣不準(zhǔn)確：使用移液器加樣時(shí)，未準(zhǔn)確吸取和加入試劑或樣本，加樣量過多或過少都會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。例如，加樣量過少可能導(dǎo)致檢測(cè)信號(hào)減弱，出現(xiàn)假陰性結(jié)果。
孵育條件不當(dāng)：孵育溫度不準(zhǔn)確、孵育時(shí)間過長(zhǎng)或過短都會(huì)影響抗原 - 抗體的結(jié)合。如孵育溫度過高，可能使蛋白變性，影響結(jié)合效果。
洗滌不充分：洗滌次數(shù)不足、洗滌時(shí)間過短或洗滌液量不足，會(huì)導(dǎo)致未結(jié)合的物質(zhì)殘留，產(chǎn)生非特異性信號(hào)，出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。
顯色反應(yīng)控制不當(dāng)：底物顯色時(shí)間過長(zhǎng)或過短，都會(huì)使檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。顯色時(shí)間過長(zhǎng)，可能導(dǎo)致本底過高；顯色時(shí)間過短，信號(hào)強(qiáng)度不夠，影響結(jié)果判斷。
5.儀器設(shè)備問題
酶標(biāo)儀故障：酶標(biāo)儀的光路系統(tǒng)出現(xiàn)問題，如光源老化、濾光片損壞，會(huì)導(dǎo)致吸光度檢測(cè)不準(zhǔn)確。或者酶標(biāo)儀的微孔板讀板位置不準(zhǔn)確，也會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。
恒溫設(shè)備故障：孵育過程中使用的恒溫箱或水浴鍋溫度控制不準(zhǔn)確，會(huì)使抗原 - 抗體反應(yīng)不能在適宜的溫度下進(jìn)行，從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
