ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒的檢測(cè)靈敏度和特異性如何衡量？

日期：2025-04-23 10:06:45

檢測(cè)靈敏度通常用最低檢測(cè)限（LOD）來(lái)表示，即能夠可靠檢測(cè)到的目標(biāo)物質(zhì)的最低濃度。一般通過(guò)對(duì)一系列低濃度標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算出能夠產(chǎn)生顯著高于背景信號(hào)的最低濃度作為最低檢測(cè)限。特異性則通過(guò)交叉反應(yīng)率來(lái)衡量，即試劑盒與其他結(jié)構(gòu)相似或相關(guān)物質(zhì)的反應(yīng)程度。通常用與目標(biāo)物質(zhì)結(jié)構(gòu)相似的其他物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算其產(chǎn)生的信號(hào)與目標(biāo)物質(zhì)信號(hào)的比值，比值越低，說(shuō)明特異性越高。

ELISA 酶聯(lián)免疫試劑盒的檢測(cè)靈敏度和特異性是衡量其性能的重要指標(biāo)，以下是一些常見的衡量方法：

1.檢測(cè)靈敏度

最小檢測(cè)限（LOD）

方法：通過(guò)對(duì)一系列已知低濃度的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行多次檢測(cè)（一般需檢測(cè) 20 次以上），計(jì)算出能與空白樣本顯著區(qū)分開的最低濃度。通常將空白樣本的均值加上 3 倍標(biāo)準(zhǔn)差所對(duì)應(yīng)的濃度作為最小檢測(cè)限。

示例：如某 ELISA 試劑盒檢測(cè)某種細(xì)胞因子，對(duì)一系列稀釋度的細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢測(cè)，當(dāng)濃度為 0.1 pg/mL 時(shí)，其檢測(cè)值與空白樣本均值加上 3 倍標(biāo)準(zhǔn)差的值相等，那么該試劑盒對(duì)這種細(xì)胞因子的最小檢測(cè)限就是 0.1 pg/mL。

功能靈敏度（FS）

方法：在規(guī)定的精密度（如變異系數(shù) CV≤20%）條件下，能夠準(zhǔn)確檢測(cè)到的最低分析物濃度。一般通過(guò)對(duì)不同低濃度樣本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，計(jì)算其精密度，確定滿足精密度要求的最低濃度。

示例：對(duì)不同濃度的樣本進(jìn)行多次檢測(cè)，當(dāng)樣本濃度為 0.5 pg/mL 時(shí)，檢測(cè)結(jié)果的 CV 為 15%，滿足精密度要求，而當(dāng)濃度再降低時(shí) CV 超過(guò) 20%，則該試劑盒的功能靈敏度為 0.5 pg/mL。

2.檢測(cè)特異性

交叉反應(yīng)率

方法：用試劑盒檢測(cè)與目標(biāo)分析物結(jié)構(gòu)相似的其他物質(zhì)，計(jì)算其產(chǎn)生的信號(hào)與目標(biāo)分析物信號(hào)的比值，以百分?jǐn)?shù)表示。通常選擇與目標(biāo)物結(jié)構(gòu)類似的多種物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)。

示例：試劑盒用于檢測(cè)甲蛋白，用其檢測(cè)與甲蛋白結(jié)構(gòu)相似的乙蛋白和丙蛋白，若乙蛋白產(chǎn)生的信號(hào)是甲蛋白的 5%，丙蛋白產(chǎn)生的信號(hào)是甲蛋白的 3%，則該試劑盒對(duì)乙蛋白的交叉反應(yīng)率為 5%，對(duì)丙蛋白的交叉反應(yīng)率為 3%。交叉反應(yīng)率越低，說(shuō)明試劑盒的特異性越好。

特異性試驗(yàn)

方法：采用已知不含目標(biāo)分析物的樣本（如正常人血清、細(xì)胞培養(yǎng)上清等），用試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，觀察是否有假陽(yáng)性結(jié)果出現(xiàn)。同時(shí)，用含有目標(biāo)分析物的樣本進(jìn)行檢測(cè)，觀察是否能準(zhǔn)確檢測(cè)到（真陽(yáng)性）。

示例：用 100 份已知不含目標(biāo)蛋白的正常人血清進(jìn)行檢測(cè)，若有 5 份出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，則假陽(yáng)性率為 5%；用 100 份含有目標(biāo)蛋白的樣本進(jìn)行檢測(cè)，若有 95 份檢測(cè)為陽(yáng)性，則真陽(yáng)性率為 95%。特異性好的試劑盒應(yīng)具有低假陽(yáng)性率和高真陽(yáng)性率。

通過(guò)以上方法可以較為全面地衡量 ELISA 酶聯(lián)免疫試劑盒的檢測(cè)靈敏度和特異性，從而評(píng)估試劑盒的質(zhì)量和適用性。