大鼠淋巴細(xì)胞趨化因子CXCL12轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)elisa
日期：2023-08-24 16:18:10
進(jìn)行大鼠淋巴細(xì)胞趨化因子CXCL12的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)ELISA需要以下步驟：
樣本制備：收集大鼠淋巴組織或細(xì)胞培養(yǎng)上清液作為樣本。使用適當(dāng)?shù)姆椒ǎ缃M織勻漿或離心，獲得清晰的樣本上清液。
免疫板涂覆：取96孔酶聯(lián)免疫吸附板（ELISA plate），將目標(biāo)物質(zhì)（如CXCL12抗原）溶解在適當(dāng)?shù)木彌_液中，按照要求，將其加入各孔中，并在4°C下過夜孵育。
阻斷：倒掉涂有CXCL12抗原的溶液，加入阻斷緩沖液（例如5%牛血清蛋白/BSA）封閉孔中未被抗原覆蓋的表面，以防止非特異性結(jié)合。
樣本孵育：將待檢測的樣本（即淋巴組織提取物或細(xì)胞培養(yǎng)上清液），與試劑盒提供的稀釋緩沖液或稀釋液混合，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求適當(dāng)稀釋，并加入各孔，孵育一段時(shí)間以進(jìn)行反應(yīng)。
洗滌：使用洗滌緩沖液多次沖洗孔中未結(jié)合的物質(zhì)，去除非特異性結(jié)合。
二抗孵育：加入與大鼠特異性IgG結(jié)合的辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的二抗，例如抗大鼠IgG HRP，在適當(dāng)?shù)臏囟认路跤欢螘r(shí)間。這個(gè)二抗將會與孔中已結(jié)合的目標(biāo)物上的抗體結(jié)合。
再次洗滌：使用洗滌緩沖液徹底清洗未結(jié)合的二抗。
底物添加：加入底物液（如TMB）并在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間內(nèi)孵育，生成可檢測的信號。
反應(yīng)終止：加入停止溶液停止底物反應(yīng)，阻止信號進(jìn)一步增加。
光密度測量：使用ELISA讀板儀或多功能酶標(biāo)儀，測量各孔中的光密度，這反映了CXCL12的轉(zhuǎn)化水平。
數(shù)據(jù)分析：通過比較樣本的光密度與標(biāo)準(zhǔn)曲線或?qū)φ諛颖镜墓饷芏?，?jì)算CXCL12的濃度或變化量。
在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前，務(wù)必閱讀和遵守相關(guān)的實(shí)驗(yàn)操作指南和安全規(guī)定，并按照試劑盒說明書中的特定步驟進(jìn)行操作。
