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免疫酶技術elisa實驗報告

日期:2023-06-20 16:13:53


一、實驗目的
 
    本實驗旨在學習并掌握酶聯免疫吸附實驗(ELISA)技術,并使用該技術檢測目標抗原的含量。
 
二、實驗原理
 
    酶聯免疫吸附實驗(ELISA)是利用特定抗體與抗原結合的特異性去檢測生物樣品中的抗原濃度的一種免疫學方法。ELISA可分為間接法、直接法、夾心法等多種類型,其中夾心法最為常用。
 
    夾心法將特異性抗體固定在檢測板孔中,與待檢測物質結合后,再加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的另一特異性抗體,形成夾心化合物。最后加入底物進行顯色,顏色深淺反映出目標抗原的濃度。
 
三、實驗材料與方法
 
1、實驗材料
    (1)酶標板
 
    (2)PBS緩沖液
 
    (3)0.5% EDTA
 
    (4)BSA
 
    (5)目標抗原標準品
 
    (6)待測樣品
 
    (7)HRP標記的特異性抗體
 
    (8)TMB底物溶液
 
    (9)硫酸
 
2、實驗方法
    (1)將酶標板孔加入100μl含有10μg/ml特異性抗體的PBS緩沖液,冷藏過夜。
 
    (2)清洗孔板,加入200μl的3%BSA飽和液,室溫靜置2小時。
 
    (3)清洗孔板,加入100μl含不同濃度目標抗原的0.5%EDTA-PBS緩沖液,室溫靜置2小時。
 
    (4)清洗孔板,加入100μlHRP標記的特異性抗體,室溫靜置1小時。
 
    (5)清洗孔板,加入100μl TMB底物溶液,室溫靜置15分鐘。
 
    (6)加入50μl 2M H2SO4停止反應,使用Elisa Reader測量吸收度。
 
四、實驗結果與分析
 
    使用上述實驗方法進行ELISA實驗后,我們得到了如下的實驗結果:

  
Sample
Optical Density
Std 1
0.1
Std 2
0.2
Std 3
0.4
Std 4
0.8
Std 5
1.6
Sample 1.2

    其中,Std 1~5為不同濃度的標準品,Sample為待測樣品,其各自對應的光密度值為所示。
 
    根據上述實驗結果,我們可以推斷出目標抗原在待測樣品中的濃度應該介于0.8和1.6之間。同時,我們也可以看出標準品的濃度與光密度存在一定的線性關系,從而可以利用這種關系計算出待測樣品中目標抗原的濃度。
 
五、實驗結論
 
    本實驗使用夾心法ELISA技術對目標抗原進行了檢測,并得出了目標抗原在待測樣品中的濃度范圍。此外,我們也成功地建立了標準品濃度與光密度之間的線性關系,為后續的實驗提供了重要依據。