免疫組織化學檢測蛋白表達方法
日期:2023-09-28 15:14:57
免疫組織化學(IHC)是常用的檢測蛋白質表達的方法,它可以通過與特異性抗體結合來標記目標分子,并將其在組織切片的位置可視化。以下是IHC檢測蛋白質表達的基本步驟:
取得組織樣本:收集需要檢測的組織樣本并制作成切片。通常使用的包括組織芯片或冰凍切片等。

抗原修復:為了在切片上準確顯示蛋白質分布,需要進行抗原修復處理,以恢復蛋白質在組織中的三維構象。抗原修復方法包括可以使用高壓加熱、微波爐加熱或酶解等。
阻斷非特異性結合:為了減少假陽性信號,需要對切片進行阻斷非特異性結合物的處理,通常使用牛血清白蛋白(BSA)、奶粉或其他可以阻止蛋白質非特異性結合的物質。
應用初級抗體:將與目標蛋白專一結合的初級抗體滴于切片上,并在適當的條件下孵育,使其與細胞或組織中的目標蛋白特異性結合。
應用二級抗體:將標記有酶或熒光素等檢測標記的二級抗體加入切片中來檢測初級抗體的結合情況。常見的標記物包括辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(AP),它們能夠催化底物的轉化,產生可見的信號,如顏色或光信號。
顯色:根據使用的檢測標記類型,在適當的條件下進行顯色,產生可視化的信號。例如:使用DAB作為底物,HRP可以將其氧化為可見的棕色沉淀。
洗滌:在處理完切片后,需要對其進行清潔處理,以去除未結合的抗體和標記物,最后制備步驟后可以通過鏡檢觀察組織切片上特定位置的顏色或熒光信號,推斷某些蛋白是否表達。
這是一般IHC的基本步驟,不同的實驗室和試劑盒可能會有所不同,具體的操作指南應遵循實驗室的標準操作規程和試劑盒的說明書。
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