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h2ax蛋白蛋白WB免疫印跡實驗

日期:2023-08-15 08:59:46


    H2AX蛋白(H2A細胞核蛋白X)是一種與DNA損傷修復相關的蛋白。WB(Western Blotting,免疫印跡)是一種常用的蛋白質檢測技術。下面是進行H2AX蛋白WB免疫印跡實驗的一般步驟:

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?    1、細胞裂解:首先,收集待測試的細胞樣本,如培養細胞或組織。將細胞或組織進行裂解,釋放出細胞內的蛋白質。裂解可以通過加入細胞裂解液或緩沖液,并進行震蕩或離心等操作進行。
 
?    2蛋白質提取:將細胞裂解產生的細胞提取物進行離心,以去除細胞碎片和細胞核等。提取物中含有目標蛋白質H2AX。
 
?    3蛋白質濃度測定:使用蛋白質檢測方法(如BCA法或Bradford法)確定蛋白質的濃度,以便加載相同濃度的蛋白質樣本。
 
?    4SDS-PAGE電泳:將蛋白質樣品按照濃度加載到SDS-PAGE凝膠上,進行電泳分離。SDS-PAGE可以將蛋白質按照其分子質量大小分開。
 
?    5轉膜:將分離的蛋白質從凝膠轉移到聚丙烯酰胺(PVDF)或氮化纖維(NC)膜上,通常使用電泳轉印裝置進行。
 
?    6阻斷與孵育:用蛋白質阻斷液(如牛血清蛋白)進行阻斷,以防止非特異性結合。然后使用抗H2AX蛋白的一抗孵育膜,使特異性抗體與H2AX蛋白結合。
 
?    7檢測與顯色:將膜進行洗滌,去除非特異性結合的抗體。然后,使用與一抗相應的二抗進行孵育,二抗通常標記有熒光素或酶。最后,使用適當的顯色劑(如ECL)進行信號發光,觀察目標蛋白質的表達水平。
 
?    8圖像獲取與分析:使用蛋白質成像系統(如X射線膠片或CCD相機)獲取膜的圖像。通過圖像處理軟件進行蛋白質帶的識別和定量分析。
 
?    這只是H2AX蛋白WB免疫印跡實驗的一般步驟。具體步驟可能因實驗設計、試劑盒選擇等因素而略有差異,建議參考相關文獻或廠家提供的操作手冊進行實驗。