畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)的基本原理
日期：2023-07-17 16:19:10
畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)是一種常用的重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)，其基本原理如下：
畢赤酵母（Pichia pastoris）是一種單細(xì)胞真菌，具有高效的蛋白合成和分泌能力。該酵母可以利用甲醇作為碳源進(jìn)行生長(zhǎng)，并在高濃度甲醇誘導(dǎo)下表達(dá)外源蛋白。
基因插入：將目標(biāo)基因的DNA序列插入到畢赤酵母的表達(dá)載體中。通常使用可表達(dá)的質(zhì)粒作為載體，其中包含啟動(dòng)子、信號(hào)肽、選擇標(biāo)記等功能元件。
轉(zhuǎn)化：將重組表達(dá)載體導(dǎo)入畢赤酵母細(xì)胞內(nèi)，通過轉(zhuǎn)化方法（如電穿孔或化學(xué)法）將外源基因?qū)虢湍讣?xì)胞的核。
選擇標(biāo)記：通過在載體表達(dá)引入選擇標(biāo)記基因，如抗生素抗性基因，可以篩選出成功轉(zhuǎn)化的畢赤酵母細(xì)胞。
培養(yǎng)與誘導(dǎo)表達(dá)：將篩選出來的重組畢赤酵母細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，在適宜的溫度和培養(yǎng)基條件下，細(xì)胞會(huì)快速繁殖。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到一定密度后，向培養(yǎng)基中加入甲醇來誘導(dǎo)目標(biāo)基因的表達(dá)。
蛋白分泌與純化：經(jīng)過甲醇誘導(dǎo)后，目標(biāo)蛋白會(huì)在畢赤酵母細(xì)胞內(nèi)合成并分泌到培養(yǎng)基中。可以通過離心、過濾等方法收集培養(yǎng)基，并使用親和層析、凝膠過濾等技術(shù)對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行純化和分離。
畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)利用畢赤酵母細(xì)胞高效的蛋白表達(dá)和分泌能力，結(jié)合外源基因的插入、轉(zhuǎn)化、培養(yǎng)與誘導(dǎo)等步驟，實(shí)現(xiàn)外源蛋白的高效表達(dá)并進(jìn)一步純化。這個(gè)系統(tǒng)被廣泛應(yīng)用于重組蛋白的生產(chǎn)和研究領(lǐng)域。
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