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op50大腸桿菌保存方法

日期:2023-06-02 11:39:14


    OP50大腸桿菌是研究蛋白質、基因和代謝過程等生命科學領域的重要模式生物。正確的保存方法可以確保OP50大腸桿菌在長期儲存期間能夠保持細胞活力并保留其生物特性。以下是OP50大腸桿菌保存的具體方法和步驟:
 
一、常規保存方法
 
    1、冷凍保存方法
    將OP50大腸桿菌接種于LB(Luria-Bertani)培養基中,在室溫下振蕩培養12小時,然后在37℃下孵育12至16小時。隨后取3~5毫升培養物加入2毫升保護液(10%甘油或15%甘露醇),混勻后分裝到干燥、無菌的凍存管中,置于−80℃冰箱內保存。
 
    2、凍干保存方法
    將OP50大腸桿菌接種于LB培養基中,使用振蕩培養器進行培養,生長至進入穩定生長期后,收集細胞,離心去除培養基,用蒸餾水洗滌幾次,剩余部分離心干燥,以氟里昂為載體進行凍干。將凍干樣品分裝入保護采血管中,置于−80℃冰箱內保存。
 
二、細節流程
 
    1、選擇優質菌株進行保存
    在進行保存前,應選擇優質、生長正常、不受污染的OP50大腸桿菌菌株作為樣品。
 
    2、收集細胞和離心
    使用LB培養基培養OP50大腸桿菌到穩定生長期后,使用離心機將細胞沉淀下來,去除培養基并用蒸餾水洗滌幾次。
 
    3、加入保護劑
    將細胞沉淀與10%甘油或15%甘露醇等保護劑混合均勻。
 
    4、分裝至凍存管中
    將混合樣品分裝至已經消毒的凍存管中。
 
    5、冷凍保存
    放置已經分裝好樣品的凍存管于−80℃冰箱中保存。
 
    6、凍干保存(可選)
    將混合樣品分裝至保護采血管中,以氟里昂為載體進行凍干處理,放置于−80℃冰箱內保存。
 
三、常見問題及解決方法
 
    1、OP50大腸桿菌保存時間有多久?
    經過正確保存,OP50大腸桿菌可以被長期保存,其保存時間一般為6個月至2年。但具體保存時間還需要考慮保存的溫度、細胞活力以及使用前的復蘇條件等因素。
 
    2、如何判斷已經保存的OP50大腸桿菌是否健康活躍?
    可以通過下板培養的方式來判斷已存放的OP50大腸桿菌是否能夠生長。同時,可以觀察存儲的樣品是否有細胞死亡或者出現了污染等情況。
 
   3、冷凍保存和凍干保存哪種方式更好?
    兩種保存方式各有優缺點。相對來說,冷凍保存更為簡便,但需要時常檢查是否將樣品意外破壞或發生溶解現象;凍干保存則相對耗費時間成本高一些,但是樣品更加穩定、易于長期保存。一般而言,在實驗室中,兩種保存方式皆可采用,需要根據不同情況來選擇合適的保存方法。
 
    4、出現OP50大腸桿菌較多的污染情況如何處理?
    一旦出現OP50大腸桿菌樣品污染,應立即采取措施清洗、消毒設備和使用一次性材料來防止污染傳播。同時,不能使用這批污染的樣品,需要重新進行保存或獲取新的樣品。
 
    OP50大腸桿菌是研究生命科學領域的重要模式生物之一,存放好這一菌株對于維持實驗的準確性意義重大。采用適當的保存方式和流程,可以確保OP50大腸桿菌在長期儲存期間能夠保持其活力和特性。