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單克隆抗體的亞型鑒定(如IgG1、IgG2a、IgM)有什么意義,常用的鑒定方法(如抗體亞型檢測(cè)試劑盒)操作時(shí)需注意哪些問(wèn)題?

日期:2025-09-24 16:55:01

一、單克隆抗體亞型鑒定的核心意義
    單克隆抗體的亞型(如IgG1、IgG2a、IgM等)直接關(guān)聯(lián)其功能特性與應(yīng)用場(chǎng)景,鑒定意義主要體現(xiàn)在3個(gè)方面:
    指導(dǎo)應(yīng)用選擇:不同亞型功能差異顯著,例如IgG1介導(dǎo)抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)和補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性(CDC)能力較強(qiáng),適合腫瘤治療類抗體;IgG2a在小鼠體內(nèi)血清半衰期長(zhǎng),更適合體內(nèi)成像實(shí)驗(yàn);IgM則因多價(jià)結(jié)合特性,常用于病原體初篩。
    保障實(shí)驗(yàn)一致性:同一抗原的單克隆抗體可能存在不同亞型,亞型不同會(huì)導(dǎo)致親和力、穩(wěn)定性差異,鑒定后可確保后續(xù)實(shí)驗(yàn)(如ELISA、Western Blot)使用統(tǒng)一亞型抗體,避免結(jié)果波動(dòng)。
    輔助生產(chǎn)與質(zhì)控:在抗體規(guī)模化生產(chǎn)中,亞型是關(guān)鍵質(zhì)控指標(biāo),需確認(rèn)產(chǎn)物與設(shè)計(jì)亞型一致,避免因亞型混雜影響產(chǎn)品純度與有效性。

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二、常用鑒定方法(以抗體亞型檢測(cè)試劑盒為例)的操作注意事項(xiàng)
     目前主流方法為間接ELISA法試劑盒(通過(guò)特異性抗亞型二抗檢測(cè)待檢單抗亞型),操作需注意以下問(wèn)題:
 
樣本預(yù)處理:
    待檢單抗需確保純度(避免血清、培養(yǎng)基雜質(zhì)干擾),建議用PBS稀釋至試劑盒推薦濃度(通常1-10μg/mL),濃度過(guò)高易導(dǎo)致假陽(yáng)性,過(guò)低則可能檢測(cè)不到信號(hào)。
    若為腹水來(lái)源單抗,需先離心去除細(xì)胞碎片,避免顆粒物質(zhì)影響包被效果。
 
試劑與孵育控制:
    試劑盒中的亞型特異性二抗(如抗IgG1、抗 IgM抗體)需在4℃避光保存,避免反復(fù)凍融導(dǎo)致活性下降;使用前需平衡至室溫,防止溫度差異影響結(jié)合效率。
    嚴(yán)格遵循孵育時(shí)間與溫度(通常37℃孵育30-60分鐘),時(shí)間過(guò)短會(huì)導(dǎo)致結(jié)合不充分,過(guò)長(zhǎng)則可能增強(qiáng)非特異性結(jié)合,升高背景信號(hào)。
 
洗滌操作:
    每步孵育后需用含吐溫-20的洗滌液充分洗滌(通常3-5次,每次30秒),避免殘留未結(jié)合抗體;洗滌不徹底是假陽(yáng)性的主要原因之一,但也需避免過(guò)度洗滌導(dǎo)致已結(jié)合抗體脫落。
 
結(jié)果判讀:
    需同時(shí)設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照(已知亞型的標(biāo)準(zhǔn)單抗)、陰性對(duì)照(PBS或無(wú)關(guān)抗體),確保實(shí)驗(yàn)體系有效;若對(duì)照異常(如陽(yáng)性對(duì)照無(wú)信號(hào)、陰性對(duì)照有信號(hào)),需重新實(shí)驗(yàn)。
    依據(jù)吸光度值(OD值)判讀,通常待檢樣本OD值高于陰性對(duì)照3倍以上且對(duì)應(yīng)某一亞型對(duì)照OD值時(shí),方可確定亞型,避免因背景信號(hào)誤判。