一抗、二抗、內(nèi)參抗體、標簽抗體的區(qū)別？

日期：2024-12-10 11:21:59

1、一抗（Primary Antibody）

定義：一抗是能特異性識別并結(jié)合目標抗原的抗體。例如，在檢測細胞中的某種特定蛋白時，一抗的抗原結(jié)合位點能夠精準地與該蛋白結(jié)合。

來源：可以是單克隆抗體或多克隆抗體。單克隆一抗是由單一的 B 淋巴細胞克隆產(chǎn)生的抗體，能識別抗原上的一個特定表位，特異性非常高；多克隆一抗則是由多種 B 淋巴細胞針對抗原的不同表位產(chǎn)生的抗體混合物，能識別抗原的多個表位，親和力相對較高。

應(yīng)用場景：在免疫組化IHC、免疫熒光IF、免疫印跡WB等實驗技術(shù)中廣泛使用。比如在 WB 實驗中，一抗與經(jīng)過電泳分離并轉(zhuǎn)印到膜上的目標蛋白結(jié)合，是檢測目標蛋白的關(guān)鍵試劑。

2、二抗（Secondary Antibody）

定義：二抗是能特異性識別一抗的抗體。它本身不直接與目標抗原反應(yīng)，而是與一抗的 Fc 段結(jié)合。例如，如果一抗是小鼠來源的，相應(yīng)的二抗可以是抗小鼠 IgG 的抗體。

來源：通常是通過免疫動物（如山羊、驢等）產(chǎn)生的，用一種動物的抗體（一抗）作為抗原去免疫另一種動物，得到針對第一種動物抗體的抗體（二抗）。

應(yīng)用場景：二抗主要用于信號放大和檢測。因為二抗上通常會標記有可以檢測的標記物，如辣根過氧化物酶（HRP）、熒光素（如 FITC、Cy3 等）等。在 WB 實驗中，標記 HRP 的二抗與一抗結(jié)合后，通過化學發(fā)光底物顯色可以使目標蛋白條帶顯現(xiàn)；在 IF 實驗中，標記熒光素的二抗使目標蛋白在熒光顯微鏡下可見。而且，由于一個一抗可以結(jié)合多個二抗，從而起到信號放大的作用。

3、內(nèi)參抗體（Loading Control Antibody）

定義：內(nèi)參抗體是用于檢測內(nèi)參蛋白的抗體。內(nèi)參蛋白是在細胞或組織中穩(wěn)定表達的蛋白，其表達量通常不受實驗處理因素的影響，例如 β - 肌動蛋白（β - actin）、甘油醛 - 3 - 磷酸脫氫酶（GAPDH）等。

來源：和一抗的來源類似，有單克隆和多克隆之分，通過免疫動物獲得能夠識別內(nèi)參蛋白的抗體。

應(yīng)用場景：在 WB 等實驗中，用于校正上樣誤差。因為在樣本處理過程中，可能會出現(xiàn)蛋白上樣量不一致的情況。通過檢測內(nèi)參蛋白的表達量，可以將目標蛋白的表達量進行歸一化處理。例如，在比較不同樣本中目標蛋白表達差異時，用目標蛋白條帶的灰度值除以內(nèi)參蛋白條帶的灰度值，就可以得到相對準確的表達量變化情況。

4、標簽抗體（Tag - specific Antibody）

定義：標簽抗體是能夠識別融合蛋白上標簽序列的抗體。在基因工程中，常常將目標蛋白與一些特定的標簽（如 His - tag、Flag - tag、Myc - tag 等）融合表達，方便后續(xù)的蛋白純化和檢測。

來源：也是通過免疫動物產(chǎn)生，用標簽蛋白作為抗原免疫動物得到能夠識別標簽的抗體。
應(yīng)用場景：在蛋白純化過程中，例如利用鎳柱親和層析純化帶有 His - tag 的蛋白時，標簽抗體可以用于檢測蛋白是否成功表達以及表達量的情況；在檢測融合蛋白在細胞內(nèi)的定位（如通過免疫熒光實驗）或者相互作用時，標簽抗體也發(fā)揮重要作用。